Выращивание штамма на 2Н2О-содержащих средах

Для выращивания штамма был выбран ступенчато-увеличивающийся градиент концентрации 2H2О в ростовых средах в присутствии 2 об.% [U -2H] MetOH, так как предпологалось, что постепенное привыкание клетки к 2Н2О будет оказывать благоприятный эффект на параметры роста и общее самочувствие культуры (таблица). Для компенсации ауксотрофности по лейцину эту аминокислоту добавляли в ростовую среду в протонированном виде в концентрации 10 мг/л.

Сначала исходный штамм выращивали на 2Н2О-содержащих средах без его предварительной адаптации к 2Н2О, для того чтобы определить его ростовые и биосинтетические параметры на этих средах. При росте исходного штамма на контрольной среде с обычной водой продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации составили 20 и 2.2 ч соответственно (таблица, опыт 1).

В промежуточных экспериментах эти параметры изменялись пропорционально концентрации 2Н2О. В частности, продолжительность лаг-фазы и время клеточной генерации увеличивались, а рост и уровень накопления фенилаланина уменьшались, причем самые низкие значения были зафиксированы на максимально дейтерированной среде с 98 об.% 2Н2О. Так, в эксперименте (5), таблица, выход микробной биомассы был снижен в 3.3, а уровень накопления фенилаланина в ростовой среде в 2.7 раз по сравнению с контролем, поэтому было необходимо проводить адаптацию штамма к 2Н2О.

Таблица. Изотопный состав ростовых сред и параметры бактериального роста исходного штамма

	Компоненты среды, об.%            H2O          2H2O           MetOH      [U -2H]                                                        MetOH				лаг-фаза (ч)	Выход биомассы((%)	Время генерации (ч)	Максимальный уровень накопления фенилаланина в ростовой среде (%)
(1)	98	0	2	0	20	100.0	2.2	100.0
(2)	73.5	24.5	0	2	34	85.9	2.6	97.1
(3)	49.0	49.0	0	2	44	60.5	3.2	98.8
(4)	24.5	73.5	0	2	49	47.2	3.8	87.6
(5)	0	98.0	0	2	60	30.1	4.9	37.0